¿Qué es cPass y cómo funciona?

Es un test ELISA de neutralización subrogado capaz de detectar el nivel de anticuerpos neutralizantes específicos contra la unión RBD-ACE2 presentes en el suero humano de personas infectadas y/o vacunadas. Esa unión es imprescindible para que exista infección por tanto si detectamos su bloqueo detectamos la presencia de anticuerpos que de verdad impiden el contagio y no solo cualquiera que genere el organismo.

Si hay AcN en la muestra, estos se unirán al dominio RBD conjugado a la enzima peroxidasa (HRP). Con los AcN neutralizando el RBD-HRP, éste no interaccionará con los ACE2 de la microplaca.

Si no hay AcN, el RBD-HRP estará disponible para interaccionar con ACE2. Tras los procesos de lavado y de revelado, se detectará la señal colorimétrica proveniente de cada pocillo en función de la cantidad del complejo RBD-HRP-ACE2 formado. Por tanto, la relación entre el nivel de AcN y la señal detectada es inversamente proporcional.

A mayor cantidad de AcN, menor RBD-HRP presente y, por tanto, menor señal. (2,3,4). cPassTM Permite cuantificar esta relación mediante el uso de una curva patrón (ver gráfica)

escenario 1

Cuando cPass no detecta anticuerpos neutralizantes (aunque si puede haber presencia de anticuerpos no válidos) y en consecuencia no hay inmunidad protectora

Si no hay Anticuerpos neutralizantes ( puede haber de otro tipo) , el RBD-HRP estará disponible para interaccionar con ACE2.

Tras los procesos de lavado y de revelado, se detectará la señal colorimétrica proveniente de cada pocillo en función de la cantidad del complejo RBD-HRP-ACE2 formado.

escenario 2

Cuando cPass detecta anticuerpos neutralizantes y en consecuencia hay inmunidad protectora

Si no hay Anticuerpos neutralizantes ( puede haber de otro tipo) , el RBD-HRP estará disponible para interaccionar con ACE2.

Tras los procesos de lavado y de revelado, se detectará la señal colorimétrica proveniente de cada pocillo en función de la cantidad del complejo RBD-HRP-ACE2 formado.

¿Cómo infecta el virus SARS-CoV-2?

La puerta de entrada del virus a la célula humana se basa en la interacción entre el dominio RBD de la proteína viral S (spike o espícula) y el receptor ACE2 de la célula humana (2,3,4).

¿Qué es la respuesta inmune – humoral?

Es nuestro mecanismo principal de defensa frente a las infecciones. El organismo de un paciente infectado o vacunado contra SARS-CoV-2 es capaz de reconocer determinadas proteínas del virus, conocidas como antígenos y desarrollar anticuerpos específicos frente a ellos. Estos anticuerpos que se unen al virus se conocen como anticuerpos de unión.

Una prueba positiva indica una respuesta inmune humoral del organismo debido a una infección o vacunación previa. Las pruebas diagnósticas cualitativas o cuantitativas que identifican la presencia de los anticuerpos frente a la región RBD (Receptor Binding Domain) de la Proteína S del SARS-CoV-2, nos permiten confirmar la existencia de estos anticuerpos de unión. (5,6).

Pero no todos los anticuerpos de unión, tienen capacidad neutralizante para bloquear la entrada del virus en la célula humana.

 

¿Qué es un Anticuerpo Neutralizante?

Existe un subgrupo de anticuerpos de unión denominado “anticuerpos neutralizantes” AcN que se definen por su capacidad de bloquear la entrada del virus en la célula humana, es decir, por su poder de neutralizar el virus, impidiendo la infección. Se estima que menos del 5% de los anticuerpos generados son realmente anticuerpos neutralizantes.(2,3,4). Los anticuerpos neutralizantes solo se pueden diagnosticar y cuantificar mediante técnicas funcionales que ponen de manifiesto su capacidad de bloquear la entrada del virus en la célula. Su importancia reside en que los anticuerpos neutralizantes son los verdaderos responsables de nuestra situación inmunitaria humoral, de nuestro grado de protección frente al SARS-CoV-2.

Aplicaciones

Interpretación de resultados cPass

¿Cuál es su nivel de protección frente a la infección por SARS-CoV-2?

¿Cuál es la capacidad neutralizante de los anticuerpos frente al SARS-CoV-2?

cPassTM proporciona el resultado basado en el % de neutralización, un resultado de fácil interpretación. También permite la semi-cuantificación de los AcN usando su calibrador Ref.: A02087

Máxima capacidad neutralizante

Este rango de valores confirma la presencia de un nivel máximo de anticuerpos neutralizantes

Nivel alto de protección inmunitaria

Ud / ml.

> 5.000

 

Media capacidad neutralizante

Dentro de este rango de neutralización, la FDA ha fijado el valor de 68% como umbral para seleccionar donantes de plasma terapeútico para el tratamiento de la COVID-19.

Nivel medio de protección inmunitaria

Ud / ml.

1.500 – 5.000

 

Baja capacidad neutralizante

Este rango está delimitado por el umbral de detección (30%) hasta el 60% de capacidad de neutralización.

Baja protección inmunitaria

Ud / ml.

< 1.500

 

Negativo, no se detecta capacidad neutralizante

El cPass usa un umbral de detección (30%) por debajo se considera prueba negativa en anticuerpos neutralizantes para SARS-CoV2

No hay protección

Cantidad exacta de anticuerpos protectores

Tras la infección o la vacunación, generamos una mezcla de anticuerpos (IgG, IgM, IgA) contra diferentes partes del virus, pero no todos se unen a la proteína S.

De los Ac que sí se unen a la proteína S, no todos se unen a las mismas regiones. La región RBD que es la llave de entrada a la célula humana.

De los Ac que sí se unen a la proteína S, y a la región RBD no todos son Ac Neutralizantes

Sólo los anticuerpos neutralizantes contra RBD neutralizantes son los encargados de bloquear la entrada. AcN anti RBD→ Protección impidiendo la entrada.

Validación y ventajas de cPass frente a PRNT

cPass sustituye a los test de neutralización viral como método habitual para determinar la capacidad neutralizante de los anticuerpos frente al SARS-CoV-2.

Los AcN juegan un papel clave en el seguimiento de la vacunación, evaluación de la inmunidad humoral, selección de donantes de plasma y desarrollo de nuevas terapias para combatir SARS-CoV2.

CPassTM proporciona información esencial sobre el nivel de AcN de manera fiable, rápida, a bajo coste y escalable(2).

Bibliografía

1. VanBlargan LA, Goo L, Pierson TC. Deconstructing the Antiviral Neutralizing-Antibody Response: Implications for Vaccine Development and Immunity. Microbiol Mol Biol Rev. 2016 Oct 26;80(4):989-1010. doi: 10.1128/MMBR.00024-15. PMID: 27784796; PMCID: PMC5116878.

2. Tan CW, Chia WN, Qin X, Liu P, Chen MI, Tiu C, Hu Z, Chen VC, Young BE, Sia WR, Tan YJ, Foo R, Yi Y, Lye DC, Anderson DE, Wang LF. A SARS-CoV-2 surrogate virus neutralization test based on antibody-mediated blockage of ACE2-spike protein-protein interaction. Nat Biotechnol. 2020 Sep;38(9):1073-1078. doi: 10.1038/s41587-020-0631-z. Epub 2020 Jul 23. PMID: 32704169.

3. Valcourt EJ, Manguiat K, Robinson A, Chen JC, Dimitrova K, Philipson C, Lamoureux L, McLachlan E, Schiffman Z, Drebot MA, Wood H. Evaluation of a commercially-available surrogate virus neutralization test for severe acute respiratory syndrome coronavirus-2 (SARS-CoV-2). Diagn Microbiol Infect Dis. 2020 Dec 24;99(4):115294. doi: 10.1016/j.diagmicrobio.2020.115294. Epub ahead of print. PMID: 33387896; PMCID: PMC7758721.

4.Meyer B, Reimerink J, Torriani G, Brouwer F, Godeke GJ, Yerly S, Hoogerwerf M, Vuilleumier N, Kaiser L, Eckerle I, Reusken C. Validation and clinical evaluation of a SARS-CoV-2 surrogate virus neutralisation test (sVNT). Emerg Microbes Infect. 2020 Dec;9(1):2394-2403. doi: 10.1080/22221751.2020.1835448. PMID: 33043818; PMCID: PMC7605318.

5. WHO (World Health Organization). Protocolo para estudios seroepidemiológicos poblacionales sobre la COVID-19, con estratificación por edades. Version 2. May, 2020.

6. Ministerio de ciencia y tecnología, Ministerio de Sanidad, Gobierno de España. Insitituto de Salud Carlos III, Consejo Interterritorial, Sistema Nacional de Salud. Estudio ENE-COVID: Cuarta ronda. Estudio Nacional de Sero-epidemiología de la infección por Sars-CoV2 en España. Dec 2020.

7. Consejo Inter-territorial. Sistema Nacional de Salud. Ministerio de Sanidad, Gobiernos de España. Grupo de trabajo de vacunación. Estrategia de vacunación. Version 2 Dec 2020.

8. Tan SS, Saw S, Chew KL, Huak CY, Khoo C, Pajarillaga A, Wang W, Tambyah P, Ong L, Jureen R, Sethi SK. Head-to-head evaluation on diagnostic accuracies of six SARS-CoV-2 serological assays. Pathology. 2020 Dec;52(7):770-777. doi: 10.1016/j.pathol.2020.09.007. Epub 2020 Sep 30. PMID: 33092816; PMCID: PMC7524664.

9. Bian C, Zhang X, Cai X, Zhang L, Chen Z, Zha Y, Xu Y, Xu K, Lu W, Yan L, Yuan J, Feng J, Hao P, Wang Q, Zhao G, Liu G, Zhu X, Shen H, Zheng B, Shen B, Sun B. Conserved amino acids W423 and N424 in receptor-binding domain of SARS-CoV are potential targets for therapeutic monoclonal antibody. Virology. 2009 Jan 5;383(1):39-46. doi: 10.1016/j.virol.2008.09.029. Epub 2008 Nov 4. PMID: 18986662; PMCID: PMC7103409.

10. Thijssen M, Devos T, Ejtahed HS, Amini-Bavil-Olyaee S, Pourfathollah AA, Pourkarim MR. Convalescent Plasma against COVID-19: A Broad-Spectrum Therapeutic Approach for Emerging Infectious Diseases. Microorganisms. 2020 Nov 5;8(11):1733. doi: 10.3390/microorganisms8111733. PMID: 33167389; PMCID: PMC7694357.

11. Lee WT, Girardin RC, Dupuis AP, Kulas KE, Payne AF, Wong SJ, Arinsburg S, Nguyen FT, Mendu DR, Firpo-Betancourt A, Jhang J, Wajnberg A, Krammer F, Cordon-Cardo C, Amler S, Montecalvo M, Hutton B, Taylor J, McDonough KA. Neutralizing Antibody Responses in COVID-19 Convalescent Sera. J Infect Dis. 2021 Jan 4;223(1):47-55. doi: 10.1093/infdis/jiaa673. PMID: 33104179; PMCID: PMC7665673.

12. Quantification Protocol Certified by GenScript – waiting for more info. 13. Vaccine Research and Development Application Note – GenScript 14. Convalescent Plasma Therapy Application Note – GenScript 15. Letter of Authorization, Reissuance of Convalescent Plasma EUA February 4, 2021 – FDA

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